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FFF02 C5891-50的原理和突出優點概括

發布時間:2022-10-14 點擊量:73
   FFF02 C5891-50無縫克隆試劑盒是一種簡單、快速、高效的DNA定向克隆技術,該技術突破傳統,不依賴內切酶和連接酶,不受限制性內切酶酶切位點的限制,利用同源重組的原理,可將任何DNA片段克隆至任何載體的任何位點。反應及轉化時間短,陽性率高。
 
  FFF02 C5891-50的原理可以概括為三步反應:
  1、T5核酸外切酶從DNA片段的5’端切割一條鏈,產生的單鏈DNA末端兩兩配對,形成一個有間隙的環狀DNA;
 
  2、DNA聚合酶通過DNA合成填補間隙,產生一個只有缺刻的環狀DNA;
 
  3、TaqDNA連接酶通過形成磷酸二酯鍵修復缺刻,得到一個完整的雙鏈DNA,也就是構建完成的載體。
 
  FFF02 C5891-50的突出優點:
 ?。?)構建的克隆沒有任何額外的堿基序列,因此是真正的"無縫克隆";
 
 ?。?)可通過一個反應將一個或多個片段快速、定向地插入到載體的任何位置;
 
 ?。?)待插入的PCR擴增產物無須酶切;
 
 ?。?)插入片段的大小范圍寬,從20bp左右的小片段到10kb左右的大片段都可以成功插入;
 
 ?。?)可通過PCR擴增獲得線性化載體,因此限制性內切酶消化并不是克隆所必須的;
 
 ?。?)酶催化的重組連接反應非??焖俸透咝?;
 
 ?。?)只有插入片段和線性化載體的末端才能發生同源重組,可以有效避免非特異性的同源重組。
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